检测原理

通常采用双抗体夹心法（ABC-ELISA）。利用特异性抗体捕获样本中的因子，再通过酶标抗体显色。

操作流程

样本准备：

血清：血液室温静置1-2小时，离心取上清。

血浆：需使用抗凝管（如EDTA或肝素），采血后立即混匀，离心取上清。

细胞上清：离心去除沉淀，取上清液检测。

注意：样本若不能立即检测，应分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

平衡与加样：

将试剂盒从冰箱取出，平衡至室温（20-25℃）。

设置标准品孔和样本孔，加入标准品或待测样本。

温育与洗涤：

加入酶标抗体，37℃温育一定时间（通常为30-60分钟）。

洗板是关键步骤，必须彻底洗涤以去除未结合的物质，减少背景干扰。

显色与终止：

加入底物TMB溶液，避光显色（通常15分钟），溶液会变蓝。

加入终止液（通常是硫酸），溶液颜色由蓝变黄。

读数与计算：

立即在酶标仪450nm处测定OD值。

根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线，从而计算出样本中淋巴细胞因子的实际浓度。

样本处理

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清于-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA/肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心（1000×g，15分钟），分装上清并冻存。

组织：匀浆后离心取上清，按需稀释。

注意事项

储存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，开封后按组分要求存放（部分需-20℃）。

交叉污染：避免吸头重复使用，不同样本更换枪头。

标准曲线：每次实验需重新绘制。

质量控制：建议每板设置复孔及质控样本。

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