大鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒

检测原理

双抗体夹心法：

预包被抗大鼠CAM单克隆抗体于微孔板

加入待测样本/标准品 → CAM抗原与包被抗体结合

加入生物素化抗CAM二抗 → 形成“抗体-抗原-二抗”复合物

加入链霉亲和素-HRP → 与生物素结合

加入TMB显色底物 → HRP催化显色（蓝色→黄色）

终止液终止反应 → 450nm波长下测定吸光度（OD值）

样本类型

适用样本：

血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆液

避免使用：

溶血、脂血、反复冻融样本

试剂盒组分

| 组分 | 数量 | 保存条件 |

| 预包被抗大鼠CAM微孔板 | 8孔×12条 | 2-8℃（干燥）|

| 大鼠CAM标准品（100 ng/mL） | 1支 | -20℃ |

| 生物素化检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20℃ |

| 链霉亲和素-HRP | 1瓶（120 μL） | -20℃（避光）|

| TMB显色液 | 1瓶（10 mL） | 2-8℃（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 2-8℃ |

| 洗涤液（30×） | 1瓶（20 mL） | 2-8℃ |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

检测性能

检测范围：1.56 ng/mL - 100 ng/mL

最低检测限（LoD）：0.39 ng/mL

精密度：

板内变异系数（CV）< 8%

板间变异系数（CV）< 10%

特异性：不与大鼠其他钙结合蛋白交叉反应

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释液配制梯度浓度（100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56 ng/mL）

加样：100 μL/孔（标准品/待测样本），37℃孵育90分钟

洗涤：1×洗涤液洗板3次

加检测抗体：100 μL/孔（生物素化抗体），37℃孵育60分钟

洗涤：重复步骤3

加酶结合物：100 μL/孔（链霉亲和素-HRP），37℃避光孵育30分钟

洗涤：重复步骤3

显色：100 μL/孔 TMB，37℃避光显色15分钟

终止：50 μL/孔终止液

读值：5分钟内测定450 nm OD值（建议630 nm校正）

结果计算

制作标准曲线（横坐标：标准品浓度对数；纵坐标：OD值）

根据样本OD值反算浓度（推荐四参数拟合）

注意事项

保存条件：

未开封试剂盒：2-8℃保存（有效期12个月）

已复溶标准品/配制试剂：分装后-20℃保存（1个月内使用）

关键控制点：

避免微孔板干燥

严格控制各步骤孵育时间与温度

TMB显色时间需优化（显色过深影响准确性）

样本处理：

血清/血浆：离心去除沉淀（2000×g，10分钟）

组织样本：按1g组织加9mL PBS匀浆 → 10000×g离心10分钟 → 取上清
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