大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法酶联免疫吸附技术（ELISA）。预包被抗大鼠ON抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后加入TMB显色底物，在过氧化物酶催化下产生蓝色产物，终止液转化为黄色。450nm波长下测定吸光度（OD值），样本浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算浓度。

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清；-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：EDTA或肝素抗凝采集，30分钟内2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清检测或冷冻保存。

试剂盒组分

预包被酶标板：8×6条

标准品：1支

标准品/样品稀释液：10mL

生物素化检测抗体（100×）：60μL

生物素化抗体稀释液：6mL

TMB显色底物、终止液、洗涤缓冲液等

操作步骤

加样：标准品及样本各加100μL至对应孔，37℃孵育1小时。

洗涤：弃液后注满洗涤液静置30秒，重复3次。

加酶标抗体：每孔加HRP标记抗体100μL，37℃孵育30分钟，再次洗涤。

显色：加TMB底物100μL，避光反应15分钟。

终止与检测：加终止液50μL，5分钟内测定450nm OD值。

注意事项

试剂盒需4℃保存，使用前平衡至室温。

避免交叉污染，不同批次组分不可混用。

标准曲线需每次实验重新绘制。

性能参数

检测范围：通常为0.5-100ng/mL（具体参考标准品浓度梯度）。

灵敏度：≤0.1ng/mL。

批内/批间变异系数：＜10%/＜15%。
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