大鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液等样本中的抗精子抗体（AsAb）含量，适用于生殖生物学研究等领域。

检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。将抗大鼠AsAb的捕获抗体预包被于微孔板，加入待测样本及标准品后，AsAb与固相抗体结合形成复合物。随后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“捕获抗体-AsAb-HRP检测抗体”夹心结构。经TMB底物显色后，颜色深浅与样本中AsAb浓度成正比，通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），依据标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的48孔或96孔酶标板

AsAb标准品及标准品稀释缓冲液

HRP标记检测抗体

洗涤缓冲液、底物A/B、终止液

标本稀释液、塑料膜板盖

（注：部分批次可能含空白对照）

样本要求与处理

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心10-20分钟取上清，-20℃或-70℃保存，避免反复冻融。

血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝，采集后30分钟内1000×g离心20-30分钟，取上清保存。

组织匀浆/细胞上清：1000×g离心10分钟取上清，分装冻存。

操作步骤

平衡：试剂盒室温平衡20分钟，取出所需板条，剩余板条密封冷藏（4℃）。

加样：标准品孔加入梯度浓度标准品50μL，样本孔加入待测样本50μL，空白孔不加。

孵育：每孔加入HRP标记检测抗体100μL，37℃温育60分钟。

洗涤：弃液后拍干，每孔加满洗涤液静置1分钟，重复洗涤5次。

显色：加入TMB底物，避光反应15-30分钟，终止液终止反应。

检测：450 nm波长测定OD值，绘制标准曲线并计算样本浓度。

注意事项

试剂盒保存于2-8℃，有效期通常为6个月（-20℃可延长至1年）。

避免反复冻融标准品及样本，解冻后需充分混匀。

实验需使用一次性吸头，避免交叉污染。

技术参数

检测范围：依标准品梯度而定（详见说明书）。

灵敏度：通常为0.1 ng/mL。

精密度：批内变异系数＜10%，批间变异系数＜15%。
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