大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体中的可溶性CD40配体 (sCD40L) 蛋白浓度。适用于科学研究，不适用于临床诊断。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA原理。预先在微孔板上包被有抗大鼠sCD40L的特异性单克隆抗体（捕获抗体）。加入样本或标准品后，其中的大鼠sCD40L会被捕获抗体结合。洗板去除未结合物质后，加入生物素标记的抗大鼠sCD40L的另一株特异性单克隆抗体（检测抗体），形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”复合物。再次洗板后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。链霉亲和素会与生物素特异性结合。洗板去除未结合的酶结合物后，加入显色底物TMB。在HRP的催化下，TMB转化为蓝色产物，加入终止液（通常是酸性溶液）后颜色由蓝变黄。在特定波长（通常450nm，需设校正波长570nm或630nm）下测定吸光度值(OD值)。OD值与样本中sCD40L的浓度呈正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中sCD40L的浓度。

样本收集与处理

血清： 使用无热原、无内毒素的采血管收集血液，室温静置30分钟至1小时凝固，然后4°C， 1000×g 离心15-20分钟。小心吸取上层血清，分装保存于-20°C或-80°C。避免反复冻融。

血浆： 使用EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂收集血液。采血后30分钟内，4°C， 1000×g 离心15-20分钟。小心吸取上层血浆，分装保存于-20°C或-80°C。避免反复冻融。注意： 不同抗凝剂可能对检测有轻微影响，建议在报告中注明。

细胞培养上清： 离心去除细胞碎片，取上清液直接检测或分装保存于-20°C或-80°C。避免反复冻融。

其他生物液体： 处理方法需根据具体样本类型优化，可能需要稀释或特殊处理以去除干扰物质。

样本处理建议： 检测前，将冻存的样本置于室温或冷水中缓慢解冻，并轻轻混匀。避免剧烈震荡产生泡沫。如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，请使用试剂盒提供的标准品稀释液进行适当稀释，并在计算结果时乘以稀释倍数。

操作步骤

准备试剂：

将所需试剂和样本提前从冰箱取出，平衡至室温(20-25°C)。

配制1X洗涤液：将浓缩洗涤液(20X)用双蒸水或去离子水按1:19稀释 (例如：1份浓缩液 + 19份水)。

复溶并配制标准品：用标准品稀释液复溶冻干标准品，然后按照说明书要求进行系列倍比稀释 (如：0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL)。标准品浓度范围仅为示例，请以实际说明书为准。

稀释生物素标记检测抗体：用检测抗体稀释液按说明书比例稀释。

稀释HRP-链霉亲和素(SABC)：用SABC稀释液按说明书比例稀释。

加样：

在微孔板相应孔位分别加入：

标准品孔：加入不同浓度的标准品溶液，100μL/孔。

样本孔：加入待测样本 (血清/血浆/上清等)，100μL/孔 (或按说明书要求体积)。

空白孔：加入标准品稀释液或检测抗体稀释液，100μL/孔 (具体参照说明书)。

用封板膜封住板孔。

37°C 孵育 X 分钟 (时间请参照具体说明书，通常为90-120分钟)。

洗板：

小心揭开封板膜，弃去孔内液体。

每孔加入300μL 1X洗涤液，静置30秒-1分钟，弃去液体。在吸水纸上拍干。重复此步骤4次 (共洗5次)。

加检测抗体：

每孔加入稀释好的生物素标记检测抗体，100μL/孔。

用新封板膜封住板孔。

37°C 孵育 Y 分钟 (时间请参照具体说明书，通常为60分钟)。

洗板： 同步骤3，洗板5次。

加SABC：

每孔加入稀释好的HRP-链霉亲和素(SABC)，100μL/孔。

用新封板膜封住板孔。

37°C 孵育 Z 分钟 (时间请参照具体说明书，通常为30分钟)。注意避光。

洗板： 同步骤3，洗板5次。

显色：

每孔依次加入显色底物液A (TMB A) 50μL，再加入显色底物液B (TMB B) 50μL (如果使用即用型TMB，则直接加100μL/孔)。注意避光。

轻轻混匀 (避免产生气泡)。

室温 (20-25°C) 避光孵育 W 分钟 (时间请参照具体说明书，通常为15-30分钟，或观察标准品孔出现明显蓝色梯度)。

终止反应：

每孔加入终止液，50μL/孔。加入终止液后，蓝色会立即转变为黄色。

轻轻混匀。

读数：

在加入终止液后30分钟内，用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度值(OD值)。

重要： 如果酶标仪具备双波长功能，请同时设置570nm或630nm作为校正波长进行读数。最终OD值 = OD450nm - OD570nm (或OD630nm)。这样可以扣除微孔板本身可能的光学干扰。
公司正在出售的产品